實(shí)驗(yàn)材料：
基礎(chǔ)培養(yǎng)基（液體或干粉） PET/PETG方形試劑瓶[NEST]
血清（常規(guī)為FBS/NBS） 補(bǔ)充劑
移液槍 電動(dòng)移液槍
15mL、50mL無(wú)菌離心管[NEST] 滅菌超純水
盒裝無(wú)菌吸頭[NEST] 血清移液管[NEST]
超凈工作臺(tái) 雙抗（青鏈霉素混合液）
杯式濾器(0.22μm PES膜) [NEST] 針式濾器 (0.22μm PES膜) [NEST]
實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：
血清準(zhǔn)備：
配置培養(yǎng)基前一天，將所需血清從-20℃冰庫(kù)取出，放置入2-8℃冰箱緩慢解凍儲(chǔ)存，使用前37℃水浴加熱。
培養(yǎng)基準(zhǔn)備：
液體基礎(chǔ)培養(yǎng)基使用前37℃水浴加熱。
實(shí)驗(yàn)流程：
基礎(chǔ)培養(yǎng)基配置（干粉）：
根據(jù)配置體積，選擇合適的滅菌后容器，在容器中倒入約90%體積的超純水，將培養(yǎng)基干粉全部倒入該容器中，用少量超純水將袋內(nèi)殘留粉末洗出。
攪拌30min使所有成分完全溶解，待溶液澄清后，根據(jù)說(shuō)明書加入適當(dāng)量的碳酸氫鈉（分析純），繼續(xù)攪拌5-10min至溶解，隨后超純水定容并調(diào)節(jié)PH值。(過濾會(huì)使培養(yǎng)基PH值稍微偏高，所以用1mol/L氫氧化鈉溶液或1mol/L鹽酸溶液調(diào)整PH值至7.20-7.30）
使用0.22μm杯式濾器[NEST]或0.22μm針式濾器[NEST]過濾除菌，并按照日常使用規(guī)格分裝入PET/PETG方形試劑瓶[NEST]中，2-8℃條件下避光保存?zhèn)溆?。【菌檢合格后方可使用】
培養(yǎng)基配置：
若含有補(bǔ)充劑，用1000μL無(wú)菌吸頭[NEST]取出適量預(yù)熱完成的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，注入補(bǔ)充劑西林瓶中，將其充分溶解，再將含有補(bǔ)充劑的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移入基礎(chǔ)培養(yǎng)基中。
接著按照血清使用比例，用血清移液管[NEST]吸取適量預(yù)熱完成的血清，注入基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，蓋上瓶蓋充分混勻。
雙抗加入：
除了特殊篩選系統(tǒng)外，一般正常培養(yǎng)狀態(tài)下，培養(yǎng)基中不添加任何抗生素。若為防止細(xì)菌、真菌污染，或懷疑細(xì)胞污染需要清除細(xì)菌，可以加入青霉素-鏈霉素雙抗溶液，其培養(yǎng)基中的終濃度為青霉素100U/ml，鏈霉素為100ug/ml。
培養(yǎng)基保存：
將配置后的完全培養(yǎng)基2-8℃條件下，避光保存?zhèn)溆?；或按照使用需求分裝入對(duì)應(yīng)規(guī)格的PET/PETG方形試劑瓶[NEST]中。隔夜或1-2天后觀察完全培養(yǎng)基，溶液澄清通透且無(wú)染菌，方可使用。
使用多余的血清，按照剩余量，可分裝入15mL/50mL的無(wú)菌離心管[NEST]中（防止血清凍存后膨脹泄露問題，離心管工作體積建議為80%），亦可分裝入合適規(guī)格的PET/PETG方形試劑瓶[NEST]中，并用封口膜封口，-20℃條件下避光保存。
使用到的NEST產(chǎn)品：
15mL、50mL無(wú)菌離心管[NEST] PET/PETG方形試劑瓶[NEST]
杯式濾器(0.22μm PES膜) [NEST] 針式濾器 (0.22μm PES膜) [NEST]
